大鼠酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化模型方法

无论是怎样给予酒精，也无论酒精量多大，大鼠的肝脏虽然受到长期刺激，酒精性肝维化至多只能到达早期肝纤维化阶段。如果这样的早期肝纤维化模型已经能够满足研究的需要，则模型复制比较容易，可以采用类似于酒精性脂肪肝的模型方法，比如，可以使用Lieber-DeCarli酒精液体饲料（标准型）喂养，也可以采用Tsukaoto-French模型给予胃内埋管方法。当然，喂养时间需要延长。详细情况，请点击在酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化模型方法网页中阅读。

下面介绍的是采用四氯化碳+酒精性液体饲料喂养法在大鼠中复制酒精性肝脏纤维化和酒精性肝硬化的方法。

给予动物四氯化碳，这本来就是中毒性肝纤维化的方法之一，肝纤维化程度可以到达严重程度。但是，在停止使用后，肝纤维化和肝硬化逐渐减轻，一般认为，这是由于肝脏发生了重塑、肝细胞再生，纤维溶解加强。

Lieber-DeCarli酒精液体饲料本来就是酒精性脂肪肝的常用模型饲料。在用这样的饲料喂养动物后发生脂肪肝（4-6周），肝脏内伴有轻微的纤维变性，但这种纤维变性并不发展。

在上世纪90年代初（1991年）已经有研究者将大鼠吸入四氯化碳蒸汽（每周5天，每天夜间持续吸入6小鼠）5-10周，可以引起轻微的肝脏坏死，但并不引起纤维化变性，而用Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养大鼠期间同样吸入四氯化碳蒸汽，5周有肝纤维化，10周有肝硬化。

毫无疑问，四氯化碳迫使肝脏纤维化得以发展，并且能够达到肝硬化阶段。

但是，存在的问题是，四氯化碳有毒性，需要特殊的环境。此外，吸入四氯化碳气体的量难以控制。事实上，单纯应用四氯化碳复制中毒性肝纤维化和肝硬化就是采用的注射或者灌胃方式。因此，在后来被进一步改进，采用注射或者灌胃方式给予四氯化碳，但比起单纯应用四氯化碳法的剂量要低得多，从而不至于引起肝纤维化。

除了上述改变，不是采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料及其对照饲料，而是AIN93标准酒精液体饲料及AIN93标准对照液体饲料，但AIN93标准酒精液体饲料中的酒精含量（酒精占的热量）与Lieber-DeCarli酒精液体饲料相同。我们无法从研究论文找到采用AIN93标准酒精液体饲料的依据，但是，从实验动物大鼠的营养需要来看，AIN93标准酒精液体饲料及其对照液体饲料是标准的营养平衡饲料，而Lieber-DeCarli酒精液体饲料和对照液体饲料在营养素平衡上有缺点。

下面就来介绍当前不少研究者使用的四氯化碳注射和AIN93标准酒精液体饲料喂养的方法。如果研究者需要改用Lieber-DeCarli酒精液体饲料，按道理，也应该可以使用。

1.大鼠四氯化碳+酒精性液体饲料喂养法的准备

（1）Wistar大鼠：雌性，200克左右，动物适应1周。

（2）腹腔注射四氯化碳：用橄榄油将四氯化碳配制成20%的溶液。

（3）AIN93标准酒精液体饲料及AIN93标准对照液体饲料。可从南通特洛菲饲料科技有限公司购买。

2.大鼠四氯化碳+酒精性液体饲料喂养法的步骤

（1）动物分组：AIN93对照液体饲料组和AIN93酒精液体饲料组。

（2）第一周：所有动物采用AIN93对照液体饲料喂养。

（3）第二周开始：AIN93对照液体饲料组用相应的饲料继续喂养，而AIN93酒精液体饲料组改用AIN93酒精液体饲料喂养。

（4）第二周开始：腹腔注射四氯化碳溶液，按照0.05毫升/kg腹腔注射，每2天注射一次，每周3次。

（5）继续喂养和注射四氯化碳溶液。共15周。

（6）第15周结束时处死动物，取标本。

3.模型评价

（1）在第15周结束时，肝脏表面结节样突起，质地硬。下图是从参考文献[1]中的截图。

E是超声影像，F是肝脏外观，G是镜下显示肝脏结构正常，有炎症和坏死。

（2）如果在第15周后继续用普通饲料喂养，不给予酒精和四氯化碳，至少在8周后肝脏仍然保持第15周时的情形。