胃内埋管是长期给予特殊液体饲料(比如酒精液体饲料、高脂肪液体饲料)的重要方法。在给予酒精液体饲料的Tsukaoto-French模型方法中,最关键的环节就是胃内埋管。在大鼠或小鼠中应用高脂系列液体饲料建立非酒精性脂肪肝模型时,甚至在使用Lieber-DeCarli酒精液体饲料时改变喂养方式时,胃内埋管也是必需的环节。
有人把用于给以液体饲料的胃内埋管错误地说成“胃造瘘”。实际上,胃造瘘是胃内埋管的另一种方法,目的是用于引流胃液,因而在胃内插管的部位与用于给以液体饲料的胃内埋管是有区别的、向胃内的插管方向是相反的,管道走向也不同。
下面以大鼠为例介绍用于液体饲料的胃内埋管方法,至于小鼠,只是麻醉剂量和胃管长度有差别,对于其他动物也都是大同小异。
一般来说,最初每只动物手术大约需要30分钟,随着越来越熟练,后来只需要10分钟。如果没有在大鼠和小鼠中做过小手术,那么,理想的办法是向贵单位的生理、药理、病理生理学、实验动物学或者其他科室的研究人员或老师指导一次。
胃管和手术器械:均需消毒。胃管和金属器械应当采用酒精浸泡。
纱布,生理盐水。采用高压灭菌消毒。
麻醉剂。
胃管制作:直径2mm的塑料或聚乙烯管制作。可以将其末端膨大。或者将管子的末端一小段在沸水中浸泡,使之弯曲约90度,作为胃管的胃内部分。膨大或者弯曲的目的是防止从胃内滑出。注意弯曲部分不宜过长,只要能达到目的就行。
第一步:埋管前处理
(1)动物空腹8-24小时。
(2)动物称重。用于计算麻醉药物剂量。
(3)动物麻醉。腹腔注射氯胺酮(ketamine)80mg/kg)和甲苯噻嗪(xylazine)4mg/kg。或者,2%戊巴比妥40-50mg/kg。
(4)腹部手术区的去毛、皮肤消毒。上腹正中为手术区,从相当于剑状软骨部位往下至腹中部,用剪刀剪毛,用面签蘸取碘酒,擦拭皮肤消毒。
(5)背部手术区去毛、皮肤消毒。在颈后正中部(从头颅骨底部至肩胛骨中部水平),采用与(4)相同方法,去毛和碘酒消毒。
第二步:埋管
(6)皮下第一隧道。在腹正中从剑状软骨部位往下至腹中部切口皮肤,暴露腹壁肌肉。再在颈后正中切开皮肤。用止血钳从颈后正中切开向腹部的切口方向沿着皮下穿刺,打成皮下隧道。用相同止血钳夹住胃管引出端从腹部切开皮下向颈后正中切口方向穿刺,于是,胃管引出端到达颈后正中切口,抽出一部分胃管。
(7)胃内埋管。在腹部看到纵向“腹白线”,在上腹部从这个腹白线向右切开腹壁肌肉,长度大约1.5cm~2.0cm,这就打开腹腔,将胃拉出,但将胃大弯送回腹腔并用盐水纱布堵住胃大弯,防止滑出而影响视野。胃体胃底交界处切开胃前臂,切口尽可能小,将胃管插入。在管周的胃前壁上围绕胃管做双荷包缝合,再拉近缝合线结扎并固定胃管。将胃回位到自然位置。
(8)整理胃管。从颈后正中切开处抽拉胃管引出端,注意调整腹部切开处胃管,使胃管的胃内端朝向幽门方向,如果胃管在皮下有扭曲则需纠正。
(9)缝合腹部的皮肤。再缝合颈后正中切口皮肤,并固定胃管引出端。将胃管引出端过长的部分剪去。套上套管。
(9)术后抗感染。立即注射抗生素,比如庆大霉素、青霉素。第二天和第三天再各注射一次。
(10)术后喂养。应当是每一笼中饲养1只。从胃管给予对照液体饲料,至少4天,在术后当天可以注入5%葡萄糖,每次3ml,给予3次。
(11)术后胃管的维护。从术后当天开始,直到实验结束,在给予液体饲料后,应当注入少量水,防止饲料堵塞胃管。
(12)饮水。从术后到实验结束的整个过程中,动物均采用自由饮水。
注意,实验时应当在准备给以液体模型饲料之前进行随机分组,而不应该在术前分组。不少研究者采取术前分组,这是不科学的。因为手术者在操作过程中手术的熟练程度会越来越高,手术对不同动物的影响程度也就不同。
因此,在对所有动物给予对照液体饲料至少4天之后,随机分组,比如,对照组,模型组。
动物要经历2次适应,第一次就是上面说的术后对液体饲料的适应。第二次适应是在分组后,要让模型组动物从对照液体饲料到模型液体饲料的适应。例如,采用酒精液体饲料时,酒精量应当逐渐递增,一周内达到所要使用的剂量。又例如,采用高脂液体饲料时,应当逐渐提高每天饲料中的脂肪量,一周时达到所需的脂肪含量。
标准液体饲料:各种动物的标准液体饲料。
对照液体饲料:各种动物使用的与模型饲料匹配的液体饲料。
液体模型饲料:各种模型饲料,包括营养素缺乏或过多的模型饲料,疾病模型饲料,中毒或者毒性模型饲料。
用户自定义的其他液体饲料:用户根据研究需要自定义的或者提出要求的液体饲料。
适用动物种类:不限。
注1:不论是哪种液体饲料,均以粉状提供,用户收到产品后,应当保存在1-4度范围内。
注2:产品随附液体饲料配制方法和使用方法说明。
注3:液体饲料喂养时不需要特殊特殊喂养瓶,但对喂养瓶有要求,在订购本产品后,本公司技术部将指导用户怎样准备。如果用户希望由本公司提供符合要求的喂养瓶,请在订购饲料时给予说明,将随同饲料一起发货。
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可以任意缺乏或过载某营养素
可以任意添加药物或测试成分
可以精确定量饲料摄入量
可以任意定制饲料