小鼠胆结石造模分析方法及注意事项
Gallstone Analyses Precedure in Mice

在取胆囊前，至少应当空腹过夜（overnight）或者空腹5小时，目的是保障动物胆囊处于充盈状态。如果动物在取胆囊前吃过食物，则胆囊更小甚至处于完全排空状态。 

小鼠胆囊体积小，壁很薄，胆囊湿重仅1mg左右。每个小鼠的胆囊可取10微升胆汁。

正常情况下，小鼠不会发生胆结石。模型饲料喂养后，往往达不到100%成石。小鼠胆固醇结石较多时，一般呈泥沙状或絮状沉淀，但较少时，往往不容易判断。而是否成石的判断极为关键，直接决定了成石率判断的准确性，从而影响药物效果的判断。

吸墨纸试验方法（blotter test）如下：

准备：吸墨纸，眼科镊和眼科剪刀。

方法：在剖腹后，在肝脏下方应当仔细观察胆囊，然后先用镊子夹住胆囊管，在胆囊基部切开胆囊，让胆汁流出到吸墨纸上，肉眼可见晶体，不论晶体多么微小，都算作结石；不论晶体多么少，只要有晶体，都算是有结石。

该方法源自Tepperman 等。此法操作和判断完成后，收集胆结石样品用于胆结石定性分析（见下文）。

上图中，胆囊的胆汁流出在吸墨纸上形成液面，A没有胆结石，B~F为大小不等、数量不等的胆结石。

胆囊取出后，将胆囊对着光线肉眼观察，按照下表Akiyoshi的6级判断标准对胆结石进行分级。

以上图片来自Akiyoshi等的论文截图。

采用红外光谱仪（infrared spectrometry）进行测定，该法称为溴化钾压片法(KBr tablet method)。

对胆固醇结石的定性： 

原理：胆固醇的吸收峰位于1053cm^-1处。通过测定证明属于胆固醇结石。

操作流程：均匀研细胆结石样品，取1～2mg粉末和干燥的溴化钾粉末200mg，在玛瑙研钵中混合均匀，装入压模，抽真空1～2分钟，加10T左右的压力（同时抽真空），取出压片，放入红外光谱仪的样品光路，溴化钾压片放入参比光路。胆固醇在1466cm^-1、1377cm^-1和1050cm^-1处有较强的胆固醇吸收峰。

了解该法，可点击到百度文库：傅立叶红外压片法操作规程。

注意：胆汁中含有白蛋白，可计算胆固醇与白蛋白吸光度的比率作为指标，白蛋白吸收峰位于1530cm^-1和1650cm^-1。采用标准胆固醇含量进行标化。

如果对胆结石中胆固醇进行定量，可采用HPLC分析方法。 

首先应当对每只胆囊的胆汁量进行定量。对胆囊和胆汁进行样品前处理后，采用生化分析法对胆汁中的胆固醇、磷脂、胆盐（胆酸）的浓度进行测定。 

对于上述描述中有不清楚之处或者其他注意事项，请与南通特洛菲饲料科技有限公司技术部联系。