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其实,胃内埋管方法非常简单,不像想象中的那样难,关键是其中的技巧,请点击阅读“用于液体饲料的胃内埋管方法”。
Tsukaoto-French模型的酒精液体饲料中:
►酒精:热量占总热量的35-47%(含量为7-8%)。准确的热量取决于研究何种模型或者需要的严重程度,一般可用40%。不管怎么说,这比Lieber-DeCarli酒精液体饲料要高些。
►脂肪提供的热量占25%,以多不饱和脂肪酸为主。也可以根据研究模型的需要和病变严重程度来调整脂肪的比例。
按照脂肪的含量,Tsukaoto-French酒精液体模型饲料分为以下类型:
酒精剂量8g/kg/d:脂肪5%,蛋白质25%,酒精32%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码TP5000(对照TP5000C);
酒精剂量12g/kg/d:脂肪4%,蛋白质21%,酒精42%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码:TP5003(对照TP5003C)。
【2】高脂酒精液体模型饲料:酒精剂量8g/kg/d:脂肪25%, 蛋白质25%, 酒精32%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码TP5001(对照TP5001C);
酒精剂量12g/kg/d:脂肪22%, 蛋白质21%, 酒精42%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码:TP5004(对照TP5004C)。
【3】超高酒精液体模型饲料:酒精剂量8g/kg/d:脂肪35%, 蛋白质25%, 酒精32%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码TP5002(对照TP5002C);
酒精剂量12g/kg/d:脂肪30%, 蛋白质21%, 酒精42%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码:TP5004(对照TP5004C)。
用于Tsukaoto-French模型的酒精饲料除了以上Tsukaoto-French酒精液体饲料,还有比较知名的Thompson-Reitz酒精液体饲料。
16g/kg/d):脂肪37%, 蛋白质23%, 碳水化合物5%,酒精35%~40%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码TP5100;
【2】高脂酒精液体对照饲料:脂肪37%, 蛋白质23%, 碳水化合物40%,南通特洛菲饲料科技有限公司模型饲料代码TP5001C。
按照体重来计算,大鼠每天给酒精液体饲料量是120ml/kg,小鼠每天给酒精液体饲料量是40ml/kg。一般来说,以下情况时动物不会出现外部异常:
生长期大鼠或者体重小于300克大鼠,每天给予的酒精量在13-15.5g/kg,最大不应超过18g/kg。
成年小鼠,在4周内可以从每天22g/kg升高到33g/kg。
动物血液中的酒精浓度升高到什么程度,决定了动物机能状态改变的程度和模型是否预期的。这里要了解以下2方面:
大鼠和小鼠对血液酒精的清除率有个阈浓度,在未到这个阈浓度前,随着饲料酒精量的增加而升高,到达这个阈浓度后,对血液酒精的清除率增大,因此,血液酒精浓度不会升高很大。所以,饲料中的酒精量并不是越高越好。还要注意的是,大鼠和小鼠的阈浓度是不同的,在复制模型时大鼠和小鼠在酒精浓度方面也就不同,不能用大鼠的资料完全套用在小鼠上。
小鼠血液酒精浓度高达250mg%时不会出现躯体的异常改变(至少2-3周内是如此),在250-350mg%之间可以出现轻度到中度的运动活性减少,在400-500mg%之间时躯体活动减少非常明显,主要原因是下肢运动严重减退。
这些告诉我们:
►如果是研究酒精对神经系统的毒性或者作用,则可以根据这些躯体活动程度判断是中度还是重度酒精毒性,还可以帮助我们为了达到所需中毒程度来设计血液中酒精浓度。
►如果是研究除了神经系统之外的器官或者复制疾病模型,为了出现明显效果,可以让血液酒精浓度尽可能大,但是,最大不应该超过400mg%。
那么,大鼠和小鼠到底需要多高的酒精浓度呢?这取决于模型的具体情况。下面以酒精性脂肪肝、肝脏纤维化、坏死的模型为例。
在250mg~400mg%之间,但是,已经是轻度到中度酒精中毒程度,应当考虑既有模型效果又不至于出现严重中毒的程度是最理想的。
例如,在大鼠中使用Tsukaoto-French酒精液体饲料复制脂肪肝或者胰腺炎、胰腺纤维化、胰腺坏死,等等模型,在酒精占7-8%时,血液酒精浓度大约在210-220毫克%。
此外,还要注意的是,饲料中的脂肪含量似乎对血液酒精浓度有影响。例如,在使用超高脂肪型时,血液酒精浓度大约在260-380毫克/100毫升。
经典的Tsukaoto-French模型是在胃内埋管后使用泵连续向胃内给予酒精液体饲料,对于胃内埋管本身不难,关键是有几个方面让有些研究者难以感到困难,下面来说怎样简化和注意点:
为了保障动物自由活动,又能持续给予液体饲料,经典的Tsukaoto-French模型在胃管引出端(颈背部)使用了可以旋转的装置。有条件的研究者可以采用这种经典的方法,对于没有条件的研究者可以这样简化:
简化胃管方法:省去该装置,在胃管引出端采用短小套管,不给予饲料时封闭管口。
调整给予饲料方法:由泵给予改为手工用注射器给予,由持续给予,改为定时定量给予,但时间间隔不能过长,因为一次给予酒精液体饲料过大时酒精量过大。
(1)从胃内埋管管的当天起,到实验结束,都要经常用注射器向胃管内注入少量水,防止胃管堵塞。
(2)在胃内埋管后的一周内使用普通饲料。
(3)在喂养一周后,给予酒精液体饲料,每只动物按照体重计算所要给予的酒精量。
(4)每天给予的酒精量由少量逐渐增大(例如,每天增加0.5g/kg),直至达到造模需要的每天应当给予的酒精量。
(5)在配制酒精液体饲料时,由于(4)中需要逐渐增加酒精量,饲料中其他碳水化合物的比例应当相应减少,以保障动物每天总热量相同。
为了指导用户使用,南通特洛菲饲料科技有限公司提供了详细的技术方案,这就更为方便。
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可以任意缺乏或过载某营养素
可以任意添加药物或测试成分
可以精确定量饲料摄入量
可以任意定制饲料