怎样使用Lieber-DeCarli酒精液体饲料

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Lieber-DeCarli酒精液体饲料应用于研究酒精的生物学作用和多种酒精性疾病模型的建立。正确使用Lieber-DeCarli酒精液体饲料是科研结果的可靠性和模型复制成败的关键。这里对Lieber-DeCarli酒精液体的使用做详细介绍。AIN93酒精液体饲料的使用与Lieber-DeCarli酒精液体饲料的用法相同。如果准备采用Tsukaoto-French模型给予酒精液体饲料，其方法可以点击查看Tsukaoto-French模型和酒精液体饲料。

Lieber-DeCarli酒精液体饲料分为标准型、低脂肪型和高蛋白质型。每一种类型都包括酒精液体饲料和相应的对照饲料，在同一种类型的酒精液体饲料和对照饲料之间碳水化合物、蛋白质和脂肪所占的热量比例是完全相同的，唯一的差别酒精液体饲料中酒精替代了其中的一部分碳水化合物。

但是，任何一种类型的Lieber-DeCarli酒精液体饲料及其对照饲料都有其局限性，或者说都存在问题。

现在我们以大鼠和小鼠为例。大鼠和小鼠标准饲料是AIN93标准饲料，右图中把Lieber-DeCarli对照液体饲料（标准型）与AIN93标准进行对比，我们能够发现什么呢？

可以看到，如果使用标准型Lieber-DeCarli对照液体饲料，实际上是高脂肪型。事实上，在Lieber和DeCarli的论文中就观察到使用对照液体饲料的大鼠，其肝脏中有轻度的脂肪肝（非酒精性脂肪肝），此外，不少研究者也观察到对照液体饲料喂养的小鼠肝脏中出现非常明显的非酒精性脂肪肝。因此，对照液体饲料喂养的大鼠是不正常的大鼠或者小鼠。

因此，我们就知道了，当使用标准型的液体饲料时，其对照液体饲料只是酒精液体饲料的对照饲料，而不是正常的饲料标准。由于关键问题是在对照饲料中脂肪过高、碳水化合物过少，因此，还需要低脂肪液体对照饲料。又由于模型组中的酒精有可能是与高脂肪含量发挥相互作用，因此，应该是采用双因素设计。

1.双因素方案设计方法

使用Lieber-DeCarli酒精对照饲料（标准型）和Lieber-DeCarli对照液体饲料时，应当是双因素设计：

►（1）Lieber-DeCarli低脂对照液体饲料组：用Lieber-DeCarli低脂酒精液体饲料的对照液体饲料喂养，其中脂肪热量占12%。

►（2）Lieber-DeCarli低脂酒精液体饲料组：用Lieber-DeCarli低脂酒精液体饲料喂养。其中，脂肪热量占12%，酒精含量5%（热量占36%）。

►（3）Lieber-DeCarli对照饲料组：用Lieber-DeCarli酒精液体饲料（标准型）的对照饲料，其中，脂肪热量占35%。

►（4）Lieber-DeCarli酒精液体饲料组。用Lieber-DeCarli酒精液体饲料（标准型）喂养，其中，脂肪热量占35%，酒精含量5%（热量占36%）。

采用这样的设计，（2）和（1）比较，以及（4）和（3）比较，能够反映酒精的作用，（3）和（1）或者（4）和（2）比较，能够反映高脂肪的作用，而（1）～（4）的综合比较，能够说明酒精和脂肪之间是否对脂肪肝有相互加强或者拮抗作用。所有这些，都可以在SPSS等软件中快速得到结果。

实际上在国外有的文献中研究酒精的作用时就是如此进行的。

2.增加一组正常对照组

由于Lieber-DeCarli酒精液体饲料及其对照液体饲料中碳水化合物全部是糊精或者蔗糖，占的比例非常高，对胰岛的刺激过强，因此，喂养的动物在代谢方法必定不同于正常喂养的动物。然而，这个缺点又是无法克服的，原因是淀粉不适合液体饲料的原料（不容易形成均匀的液体），因此，在很多论文中都还采取了加做一个正常对照组，即采用正常动物的颗粒型标准饲料作为标准对照。

喂养方法非常重要。有的饲料供应商虽然给出了喂养的注意点，但过于简单，有些重要环节没有给出。下面，我们只对几个关键点做介绍，如果你是从南通特洛菲饲料科技有限公司购买的该公司生产的酒精液体饲料，应当从该公司技术部索取喂养说明，其中详见的列出了操作步骤和注意点，应当务必阅读，按要求操作。

1.酒精含量的确定方法

很多研究者，甚至有些国际上知名的实验动物饲料公司，在确定酒精含量上犯错误。为什么犯错误呢？

我们都知道，纯酒精的比重并不是像水那样是1，而是0.7893。这一点如果被忽视，酒精的使用量就会偏低。当然，在南通特洛菲饲料科技有限公司酒精液体饲料的产品说明中，用户可以直接查表，不需要担心酒精含量的问题。

2.要有适应期1周

常用实验动物中，大多数动物的饲养都不是液体饲料，在给为液体饲料时，需要有一个适应过程，在适应过程中机体的机能改变也会有调整。此外，动物也需要对饲料中的酒精有一个适应过程，不论所使用的实验动物是否厌恶酒精，也不论厌恶酒精的程度有多大，都是如此。

因此，把购买的实验动物在实验室喂养一周以适应饲养环境之后，还要给予一周的时间适应对照液体饲料和酒精液体饲料。方法是，一周内对照液体饲料组喂养相应的对照液体饲料，而酒精液体饲料喂养组的过渡方法请见右表。

3.配对喂养

很多研究者只顾饲料中的酒精含量是否准确，而忽视了动物摄入的酒精量，从而造成实验误差，尤其是增大动物之间分析结果的变异度。

想必研究者在阅读其他作者的文献时看到其中都使用了“pair-fed”一词。这是什么意思呢？从字面上可以翻译为“配对喂养”。那么，怎样配对？

pair-fed的意思是，按照体重大致相同的两只实验动物配对，分笼饲料（一笼一只），其中一只动物喂对照液体饲料，另一只喂酒精液体饲料，两只动物的饮食量相同。

配对喂养往往对实验室条件是一种挑战，如果一批使用的动物数量较多，这种情况下占用大量笼器具和空间。因此，不少实验室采用退而求其次的方法，一笼多只，但仍保持对照液体饲料组的动物每天平均饮食量和酒精液体饲料组的动物每天平均饮食量相同。但是，这种情况下每笼的实验动物数不应该过多。如果过多，不同动物的饮食量差别就会过大，得到的酒精量就会有比较大的差别，影响研究结果。尤其是，因为酒精对免疫机能的影响，不同动物之间会出现“弱势”的首先死亡，这可能被其他动物作为“美餐”。想必对科研结果的影响是可想而知。

4.控制饮食量方法

在喂养过程中，摄入酒精液体饲料的动物往往摄入量与对照液体饲料组动物的摄入量往往不一致，这就造成营养因素影响研究结果。为了避免这种情况发生，应当确保两组动物的饮食量相同。采用的方法可以是，对照液体饲料组今天的投料量等于昨天酒精液体饲料组的实际摄入量，这样可以达到对照液体饲料组的动物每天平均饮食量和酒精液体饲料组的动物每天平均饮食量相同。

5.跟踪动物的一般情况和死亡情况

酒精液体饲料喂养不可避免地引起动物死亡。如果采用一笼多只的喂养方法，死亡的动物将被其他动物吞吃，后果非常糟糕，因此，一旦发现应当及时清除。无论如何，应当力所能及地采用标准的pair-fed方法：一笼一只。

在酒精液体饲料喂养期间，动物对外界的反应特别敏感、烦躁，因此，观察动物情况时应当避免任何声音，避免任何不当刺激。