II型糖尿病大血管病变（动脉中层钙化、硬化）模型造模方法及造模饲料
Diabetic Medial Elastocalcinosis Model (MEC Model)/Arterial Media Calcification (AMC Model)

II型糖尿病（II type Diabetes）的大血管并发症之一是动脉中层钙化、硬化（Medial Elastocalcinosis，MEC；或，Arterial media calcification，AMC)，属于门克伯格氏硬化（Mönckeberg’s medial calcific sclerosis）。表现为血管中层钙沉积，血管弹性下降和硬化。目前造模方法有两种。

该方法是由Ren等我国研究者将II型糖尿病模型方法与Niederhoffer等研究者用于动脉钙化模型的VDN法的结合起来，即用高脂肪模型饲料喂养从而诱导胰岛素抵抗，在此基础上注射链脲佐菌素（streptozocin，STZ），从而形成II型糖尿病模型，一周后注射维生素D3并给予烟碱，继续喂养一段时间后观察血管钙化及其相关指标。

（1）动物：雄性大鼠，170g左右。

（2）模型饲料：用于II型糖尿病模型饲料(T2DM model)，选择其中的高脂高胆固醇模型饲料。

（3）第一阶段：高脂肪高胆固醇模型饲料喂养一段时间（取决于高脂模型饲料的热量和具体情况）后，腹腔注射低剂量STZ（例如，20mg/kg体重）。

（4）第二阶段：STZ注射1周后，肌肉注射维生素D3（以30万IU/kg体重）1次，并且采用灌胃法给予烟碱（尼古丁，nicotine）25mg/kg体重，晚上追加一次烟碱注射。继续喂养8周左右。

（5）取材：动物麻醉后取血和胸主动脉。

（6）参考结果：动脉钙含量、高级糖基化终末产物(AGEs，advanced glycation end products）、碱性磷酸酶表达增加。

该方法是由 Bouvet等建立。是在高脂肪模型饲料喂养后低剂量STZ注射后给予华法令（Warfarin）和维生素K1，从而促进血管钙化。该方法中采用华法令是抑制基质Gla蛋白（Matrix Gla protein，MGP)的活化（与动脉中层钙化病人的MGP活性降低相应），而维生素K1抑制血管壁的MGP的羧化。

（1）动物：雄性大鼠，3～4周龄。

（2）模型饲料：用于II型糖尿病模型饲料(T2DM model)，选择其中的高脂模型饲料。

（3）第一阶段：高脂肪模型饲料喂养一段时间（取决于高脂模型饲料的热量和具体情况）后，腹腔注射低剂量STZ（例如，30mg/kg体重）。

（4）第二阶段：STZ注射4周左右，饮水中添加华法令（以每天摄入20mg每kg体重），并且每天皮下注射维生素K1（phylloquinone，15mg每kg体重），由于动物体重改变，因此，应当每隔天一次调整剂量。

（5）取材：动物麻醉后取血和股动脉。

（6）参考结果：股动脉钙含量增加，骨调素（osteopontin，股桥蛋白）和碱性磷酸酶增加，外膜表达肿瘤坏死因子TNF-α和转化生长因子TGF-β（transforming growth factor-β)。

(1)关于STZ注射及II型糖尿病造模中血糖的关键点

上述方法中采用了STZ低剂量注射，这有利于避免高剂量STZ引起I型糖尿病的可能性。然而，低剂量注射引起的血糖升高幅度，在动物之间可能相差较大，甚至有些动物血糖几乎没有明显升高。正因为如此，在STZ注射后需要根据血糖升高幅度进行筛选。而筛选本身违背了统计学随机原则，使得统计学分析的结果难以排除筛选带来的偏倚。

为了尽可能减小由于STZ注射引起的动物之间血糖相差过大，可以与南通特洛菲饲料科技有限公司技术部交流应当注意的关键点。

(2) 关于高脂模型饲料和喂养方法

请可以与南通特洛菲饲料科技有限公司技术部交流。

参考文献

 Niederhoffer N, Bobryshev YV, Lartaud-Idjouadiene I, Giummelly P, Atkinson J. Aortic calcification produced by vitamin D3 plus nicotine.J Vasc Res. 1997 Sep-Oct;34(5):386-98.

 Demer LL, Tintut Y. Vascular calcification: pathobiology of a multifaceted disease. Circulation. 2008 Jun 3;117(22):2938-48. doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.107.743161.