大鼠非酒精性脂肪肝、肝纤维化和肝硬化模型复制方法

在大鼠中有多种方法可以建立非酒精性脂肪肝模型，在“非酒精性脂肪肝模型建立方法”已经介绍。但是，要让酒精性脂肪肝发展成肝纤维化和肝硬化，目前只有使用lipotrope缺乏饲料的喂养方法，这在“非酒精性肝纤维化模型和酒精性肝硬化模型的方法和饲料选择”中也已经介绍。

这里就大鼠中应用lipotrope缺乏饲料复制肝纤维化和肝硬化模型做一些介绍。

建议点击Lipotrope缺乏饲料(lipotrope deficient diet)和高脂肪Lipotrope缺乏饲料阅读详细介绍。

Lipotrope缺乏饲料有多种类型，包括胆碱缺乏饲料，氨基酸配制的胆碱缺乏饲料(CDAA diet)，蛋氨酸和胆碱缺乏饲料，高脂肪、低蛋白、胆碱缺乏饲料，以及胆碱、蛋氨酸、维生素B12、叶酸缺乏饲料。这些饲料与一般研究中相同名字的饲料是不同的。

选择哪一种lipotrope缺乏饲料，应当注意以下几点：

（1）他们引起的肝脏病变情况的差别，并根据研究目的和要求来选择

尤其要注意的是胆碱缺乏饲料与经典型的lipotrope缺乏饲料有很大差别，下表可供参考。

从上表中看到，胆碱缺乏饲料与经典型的lipotrope缺乏饲料喂养的效果差别很大，其中，我们不能忽视的是肝脏坏死情况的差别，胆碱缺乏饲料引起严重的肝坏死，而lipotrope缺乏饲料喂养的大鼠肝脏中并不明显、但肝硬化发生率很高。关于这种差别的原因，当前还无法解释。

从上表中看到，胆碱缺乏饲料复制的模型主要是从门管周围开始纤维化，这样复制的肝硬化模型，常常伴有明显的门脉高压，甚至静脉曲张。正因为如此，胆碱缺乏饲料，尤其是MCD饲料用于可用于建立门脉高压症模型。

（2）肝脏病变程度

肝脏病变程度取决于大鼠的品系、性别、年龄、和饲料中lipotrope因子的缺乏的程度。

性别差异：一般来说，雌性不如雄性敏感，甚至在雌性大鼠中不能成功复制，主要原因是雌激素对蛋氨酸代谢的作用。正因为如此，一般采用雄性大鼠复制肝纤维化和肝硬化模型。

年龄不同：任何年龄的大鼠都可以用于复制肝纤维化和肝硬化，但是，年龄越小越敏感，病变程度也不相同。在文献中，常用的断乳大鼠或者体重在200-300克左右。

饲料中lipotrope因子的缺乏的程度：Lipotrope因子缺乏程度越重，病变程度也越重，模型需要的时间也越短。但是，动物的一般情况也更差，死亡率也越高。

饲料中蛋白质类型：不同蛋白质的效果不同。此外，用CDAA饲料比用蛋白质配制的饲料，肝纤维化和肝硬化的病变程度要轻，但不同动物之间的差别要小（动物之间的一致性比较好）。

除了以上两方面以外，在选择Lipotrope缺乏饲料的类型时，还需要结合以下情况综合考虑。

不论是哪一种类型的Lipotrope缺乏饲料，发生非酒精性脂肪肝的速度都很快，一般只需要几周的时间。如果复制肝纤维化则需要的时间比较长，而要复制肝硬化模型，则需要的时间更长。例如，使用lipotrope缺乏饲料（经典型），建立肝纤维化模型需要6周以上，而建立肝硬化模型，需要12-24周。

不同类型的lipotrope缺乏饲料，引起的病变进程是有区别的。例如，CDAA饲料与CD饲料虽然都能引起大鼠肝硬化，但是在喂养到16周时，CDAA饲料在16周时100%大鼠肝硬化，而CD饲料才达到33%。

肝纤维化和肝硬化模型所需时间应当尽可能参考已发表的文献，结合所用实验动物的种类或品系、lipotrope缺乏饲料的类型来估计。这些方面的调研非常重要。由于肝纤维化和肝硬化模型需要的时间比较长，而不同动物之间的肝脏纤维化病变进展有的快有的慢，因此，模型建立究竟需要多长时间，要采取跟踪方法，比如，可以从模型组中随机抽取动物取肝脏标本（组织活检或者处死取标本）进行病理检测，又如，有条件的情况下可以采用小动物超声波跟踪肝脏情况。当然，采用这些跟踪方法时，在研究设计阶段应当加大动物数。

不论是哪一种Lipotrope缺乏饲料，其中的胆碱是极度缺乏的，甚至处于“无”或“0%”，而动物对于胆碱缺乏极度敏感，在喂养的初期如果完全使用这种饲料可造成急性缺乏症状（如，肾出血），甚至导致死亡或者增大随后喂养期间的死亡率。因此，在喂养初期应当逐渐过渡。过渡方法可以向饲料生产商咨询，比如，从南通特洛菲饲料科技有限公司购买时，该公司技术部会主动提供详细过渡方法的建议。

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如果希望采用高脂肪高胆固醇建立肝纤维化或肝硬化模型，可以采用兔作为模型动物，见“兔非酒精性脂肪肝、肝纤维化和肝硬化模型复制方法”。