改善缺铁性贫血功能评价方法(动物实验部分)
Method for the Assessment of Improving
Nutritional Anaemia Function

2012年4月23日国家食品药品监督管理局颁发了最新“保健功能评价方法”。这里是根据“改善缺铁性贫血功能评价方法”中的动物实验部分的内容进行了整理。

1. 体重

2. 红细胞比积/红细胞游离原卟啉

3. 血红蛋白

1. 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。

血红蛋白指标阳性，红细胞游离原卟啉/红细胞压积二项指标一项指标阳性，可判定该受试样品改善缺铁性贫血功能动物实验结果为阳性。

1. 原理

用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物缺铁性贫血的作用。

3. 实验动物

健康初断乳大鼠，单一性别，每组大鼠8－12只。

3. 低铁饲料

（基于AIN93G标准的饲料，但降低铁含量。）规定中的配方有若干错误！

4.剂量分组及受试样品给予时间：

实验设三个剂量组和一个低铁对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组（硫酸亚铁或乳酸亚铁，剂量为2 ppm或2 mg/(kgbw)，以Fe元素计）。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

5. 实验步骤

（1）建立缺铁性贫血大鼠模型

选用健康断乳大鼠在实验环境下适应3－5天后饲予低铁饲料及去离子水（或双蒸水），采用不锈钢笼及食罐，同时，采用剪尾取血法放血，5天一次，每次0.3－0.5ml。实验过程中避免铁污染。自第3周开始每周选取部分大鼠采尾血测Hb，如多数动物Hb低于100g/L时，测定全部大鼠的体重及Hb。

（2）恢复实验

选取Hb<100g/L的大鼠作为实验动物，根据贫血大鼠Hb水平和体重将其随机分为低铁对照组和三个实验组，各组均继续饲予低铁饲料，低铁对照组给予相应溶剂，实验组分别给予不同剂量的受试样品，受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天，测定体重及各项血液学指标。

6. 观察指标

体重、血红蛋白、红细胞比积/红细胞内游离原卟啉。

(1)血红蛋白测定:

氰化高铁法，或标准曲线法。详细方法和注意事项：略。

数据处理和结果判定:

实验数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

结果判定：受试样品组与对照组比较，血红蛋白浓度升高经统计处理差异有显著性，且受试样品组前后升高幅度平均达到10g/L以上，判定该实验结果阳性。

(2)红细胞内游离原卟啉测定:

详细方法和注意事项：略。

数据处理和结果判定:

实验数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计

结果判定：受试样品组与对照组比较，红细胞内游离原卟啉降低经统计处理差异有显著性，即可判定该实验结果阳性。

(3)红细胞压积测定：

使用全自动血细胞分析仪进行。数据处理及结果判定同"红细胞内游离原卟啉测定"。

7. 数据处理和结果判定

实验数据可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

结果判定:

受试样品组与低铁对照组相比，若血红蛋白差异有显著性，且其前后平均升高幅度达到10g/L以上，同时，受试样品红细胞内游离原卟啉或红细胞压积与低铁对照组相比差异有显著性，可判定该受试样品改善缺铁性贫血功能动物实验结果阳性。

8. 注意事项

本项实验关键在于贫血模型的建立。低铁饲料含铁量最好控制在9mg/Kg以下，所用试剂应为分析纯，动物饮用水应为去离子水或双蒸水，采用不锈钢笼具，所用器皿应用10%硝酸溶液处理。实验过程中严防外来铁的污染及彼此交叉污染。